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提问:han_2005
级别:五年级
来自:福建省福州市

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已解决的问题 应用DNA同源重组原理?基因敲除主要是应用DNA同源重组原理,用同源DNA片段替代靶基因片段,从而达到基因敲除
基因敲除主要是应用DNA同源重组原理,用同源DNA片段替代靶基因片段,从而达到基因敲除的目的,在基因敲除技术中涉及到的变异类型是
A基因重组 B基因突变 C人工诱变
答案选A,我想问下为什么,--应用DNA同源重组原理,用同源DNA片段替代靶基因片段怎么理解的啊
 提问时间:2007-04-08 14:08:32    评论举报
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回答:麻辣教师
级别:高一


2007-04-08 18:44:57
来自:四川省达州市
基因敲除

曹巍(军事医学科学院情报研究所)

一、概述

1、概念

基因敲除(geneknockout),是指对一个结构已知但功能未知的基因,从分子水平上设计实验,将该基因去除,或用其它顺序相近基因取代,然后从整体观察实验动物,推测相应基因的功能。这与早期生理学研究中常用的切除部分-观察整体-推测功能的三部曲思想相似。

基因敲除除可中止某一基因的表达外,还包括引入新基因及引入定点突变。既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因,也可以用正常基因敲除相应的突变基因。

2、技术路线

基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的一门新技术。80年代初,胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年,首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年,Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。此后的几年中,基因敲除技术得到了进一步的发展和完善。

基因敲除的技术路线如下:
(1)构建重组基因载体﹔
(2)用电穿孔、显微注射等方法把重组DNA转入受体细胞核内﹔
(3)用选择培养基筛选已击中的细胞﹔
(4)将击中细胞转入胚胎使其生长成为转基因动物,对转基因动物进行形态观察及分子生物学检测。

基因敲除的靶细胞目前最常用的是小鼠ES细胞。基因敲除的技术路线虽不复杂,但由于高等真核细胞内外源DNA与靶细胞DNA序列自然发生同源重组的机率非常低,约为百万分之一,要把基因敲除成功的细胞筛选出来是一件非常困难的工作。因此,同源重组的筛选和检测就成了基因敲除技术所要解决的关键问题。目前已有多种筛选方法,其中1988年犹它大学的Capecchi教授的研究组发展的"正负双向选择系统"适用范围宽且效率较高。
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回答:zhangfy
级别:大四


2007-04-08 18:57:45
来自:河北省石家庄市
楼上资料不错的..
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回答:小黑牛
级别:一级教员


2007-04-08 22:26:16
来自:安徽省滁州市
基因敲除主要是应用DNA同源重组原理,用同源DNA片段替代靶基因片段,从而达到基因敲除的目的,在基因敲除技术中涉及到的变异类型是
A基因重组 B基因突变 C人工诱变
答案选A,我想问下为什么,--应用DNA同源重组原理,用同源DNA片段替代靶基因片段怎么理解的啊-------
按教材:高等动植物中的基因重组通常在有性生殖过程中进行,第一是在性细胞成熟时发生减数分裂时同源染色体的部分遗传物质可实现交换,导致基因重组。第二是在性细胞成熟时发生减数分裂时非同源染色体的自由组合,导致基因重组。由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合,形成新DNA分子的过程就类似于第一,也叫基因重组。用同源DNA片段替代靶基因片段,从而达到基因敲除的目的,就类似于同源染色体的部分遗传物质实现交换而导致的基因重组。
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